抗原修復(fù)鍋采用的修復(fù)方法一共有兩種
更新時(shí)間：2020-02-25 點(diǎn)擊次數(shù)：1976次
抗原修復(fù)鍋怎樣工作？
看上去，抗原修復(fù)鍋似我們烹飪的高壓鍋。這是一款功能*的“高壓鍋”，主要用于抗原暴露的工作，主要的工作原理也是裝玻片的幾個(gè)分室可以達(dá)到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制器來(lái)保持一定的溫度和壓力及一定的時(shí)間，這些工作參數(shù)都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)。當(dāng)達(dá)到需要的溫度，抗原修復(fù)鍋會(huì)在該溫度下保持幾分鐘，之后鍋內(nèi)玻片被冷卻2個(gè)多小時(shí)，特殊設(shè)材質(zhì)的內(nèi)鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。
免疫組織化學(xué)方法成功與否關(guān)鍵在于抗原決定簇的保存和暴露。組織經(jīng)甲醛固定，甲醛的醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián),使決定簇的構(gòu)像改變，從而影響檢測(cè)蛋白表達(dá)。要充分暴露抗原決定簇，通常用到抗原修復(fù)鍋。強(qiáng)烈推薦EMS*有競(jìng)爭(zhēng)力的一款產(chǎn)品，適于甲醛固定的組織經(jīng)石蠟包埋后進(jìn)行免疫染色前的處理，配合特別的抗原修復(fù)緩沖液確保你得到z高質(zhì)量的免疫染色效果。
(1)抗原修復(fù)鍋的加熱修復(fù)法：加熱修復(fù)法分為高壓加熱修復(fù)法和微波修復(fù)法兩種：
?、俑邏杭訜嵝迯?fù)法：取一定量枸櫞酸鹽緩沖液(pH＝6．0)于高壓鍋中，大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放人己沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣緊壓力閥，繼續(xù)加熱至噴汽。
從噴汽開(kāi)始計(jì)時(shí)．1～2分鐘后，高壓鍋離開(kāi)熱源，冷卻至室溫(稍冷后，可在自來(lái)水籠頭下加速冷卻)，取出玻片，先用蒸餾水沖洗2次，再用PBS沖洗2次，每次3分鐘。注意加熱時(shí)間長(zhǎng)短的控制很重要，從組織切片放人緩沖液到高壓鍋離開(kāi)火源的總時(shí)間控制在5―8分鐘為好．
時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)使染色背景加深。緩沖液的量必須保證能浸泡到切片，用過(guò)的枸櫞酸緩沖液不能反復(fù)使用。
②抗原修復(fù)鍋的微波修復(fù)法：取一定量pH6．0枸櫞酸鹽緩沖液(緩沖液量不得小于500m1)，于微波盒中，微波加熱直至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩沖液中，中高檔微波繼續(xù)處理15―20分鐘，取出微波盒冷卻至室溫，從緩沖液中取出玻片。先用蒸餾水沖洗2次，之后用PBS沖洗2次，每次3分鐘。
(2)胰蛋白酶消化修復(fù)法：主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的顯示。使用0．1％氯化鈣液(pH7．8)制成0．1％胰蛋白酶液，37℃孵育切片15～30分鐘，之后用PBS洗滌3次，每次3分鐘。
(3)胃蛋白酶消化修復(fù)方法：主要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的顯示。一般使用濃度為0.4％，消化時(shí)間為37℃，30～180分鐘。
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